- 品名： 白鯊Biosharp BL928A 線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔檢測試劑盒
- 型號： BL928A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
產(chǎn)品簡介：
線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔檢測試劑盒（Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit）是一種采用膜通透性的熒光探針Calcein AM檢測線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放程度的試劑盒。相比于基于線粒體膜電位的方法更直接地檢測到線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放程度的變化。由于Calcein AM的毒性特別低，并且不會抑制細胞的增殖、趨化性等絕大部分功能，所以與其它同類產(chǎn)品如CFDA SE等相比是更適合染活細胞的熒光探針。
本試劑盒的檢測原理如下，Calcein AM是一種可以對活細胞進行熒光染色的非極性染料，可通過被動運輸進入細胞內(nèi)并在細胞質(zhì)組分包括線粒體等中積累。在細胞中，幾乎沒有熒光的Calcein AM被細胞內(nèi)的酯酶水解去除乙酰甲酯，生成沒有膜通透性的極性熒光染料鈣黃綠素（Calcein or Fluorexon），從而使Calcein滯留在細胞內(nèi)，并使細胞質(zhì)包括線粒體等呈現(xiàn)強綠色熒光。Calcein本身是一種金屬絡(luò)合指示劑，在生理pH條件下和Co2+、Ni2+、Cu2+、Fe3+和Mn2+等金屬離子絡(luò)合時，熒光信號會發(fā)生淬滅。本試劑盒提供了CoCl2用于淬滅細胞質(zhì)中Calcein的綠色熒光，但由于正常情況下線粒體的MPTP是關(guān)閉的，此時CoCl2不能進入線粒體，所以Calcein AM染色后經(jīng)CoCl2處理會導(dǎo)致僅線粒體內(nèi)呈現(xiàn)Calcein的綠色熒光。作為對照，可將細胞用Calcein AM染色并經(jīng)過CoCl2處理之后，用鈣離子載體Ionomycin進一步處理以誘導(dǎo)細胞外的Ca2+大量進入細胞內(nèi)和線粒體基質(zhì)并導(dǎo)致MPTP的開放，或者用適當(dāng)?shù)臈l件刺激細胞導(dǎo)致MPTP少量或大量開放，從而使部分Calcein釋放進入細胞漿和鈷離子結(jié)合而失去熒光，同時細胞漿中的鈷離子能進入線粒體內(nèi)而導(dǎo)致其中的Calcein的綠色熒光部分甚至全部淬滅，最終導(dǎo)致線粒體中Calcein綠色熒光減弱或消失。這樣根據(jù)線粒體中Calcein綠色熒光的強弱來判斷線粒體MPTP開放的程度，綠色熒光越強，開放程度越低，綠色熒光越弱，開放程度越高。
如果用于流式細胞儀，每個樣品的檢測體系體積為1ml時，可以進行100次檢測；96孔板每孔檢測體系的體積為100μl時可以檢測1000次。
產(chǎn)品組份：
編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
BL928A-1 | 檢測緩沖液 | 200mL |
BL928A-2 | Calcein AM (1000X) | 110uL |
BL928A-3 | CoCl2 (100X) | 1mL |
BL928A-4 | Ionomycin (200X) | 600uL |
BL928A-5 | 促溶劑（100X） | 1.2mL |
使用方法（僅供參考）：（詳細見說明書）
注意事項：
1．熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2．Calcein AM (1000X)須盡量避免反復(fù)凍融。如果多次使用，請注意適當(dāng)分裝。
3．CoCl2有腐蝕性，對人體有害或有刺激性，對人體有呼吸道、生殖等特定器官毒性，或致畸致癌毒性，操作時請小心，并確保有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)，并須注意避免腐蝕其它物品。
4．CoCl2對水生生物有毒或有害，禁止直接排入環(huán)境。
5．本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
6．為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件：
-20oC保存，一年有效。Calcein AM (1000X)和Ionomycin (200X)需要避光保存。
