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產(chǎn)品目錄

白鯊Biosharp BL928A 線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔檢測試劑盒

品名: 白鯊Biosharp BL928A 線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔檢測試劑盒
型號: BL928A
  • 產(chǎn)品詳情
  • 規(guī)格參數(shù)

產(chǎn)品簡介:

線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔檢測試劑盒(Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit)是一種采用膜通透性的熒光探針Calcein AM檢測線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放程度的試劑盒。相比于基于線粒體膜電位的方法更直接地檢測到線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放程度的變化。由于Calcein AM的毒性特別低,并且不會抑制細胞的增殖、趨化性等絕大部分功能,所以與其它同類產(chǎn)品如CFDA SE等相比是更適合染活細胞的熒光探針。

本試劑盒的檢測原理如下,Calcein AM是一種可以對活細胞進行熒光染色的非極性染料,可通過被動運輸進入細胞內(nèi)并在細胞質(zhì)組分包括線粒體等中積累。在細胞中,幾乎沒有熒光的Calcein AM被細胞內(nèi)的酯酶水解去除乙酰甲酯,生成沒有膜通透性的極性熒光染料鈣黃綠素(Calcein or Fluorexon),從而使Calcein滯留在細胞內(nèi),并使細胞質(zhì)包括線粒體等呈現(xiàn)強綠色熒光。Calcein本身是一種金屬絡(luò)合指示劑,在生理pH條件下和Co2+、Ni2+、Cu2+、Fe3+Mn2+等金屬離子絡(luò)合時,熒光信號會發(fā)生淬滅。本試劑盒提供了CoCl2用于淬滅細胞質(zhì)中Calcein的綠色熒光,但由于正常情況下線粒體的MPTP是關(guān)閉的,此時CoCl2不能進入線粒體,所以Calcein AM染色后經(jīng)CoCl2處理會導(dǎo)致僅線粒體內(nèi)呈現(xiàn)Calcein的綠色熒光。作為對照,可將細胞用Calcein AM染色并經(jīng)過CoCl2處理之后,用鈣離子載體Ionomycin進一步處理以誘導(dǎo)細胞外的Ca2+大量進入細胞內(nèi)和線粒體基質(zhì)并導(dǎo)致MPTP的開放或者用適當(dāng)?shù)臈l件刺激細胞導(dǎo)致MPTP少量或大量開放,從而使部分Calcein釋放進入細胞漿和鈷離子結(jié)合而失去熒光,同時細胞漿中的鈷離子能進入線粒體內(nèi)而導(dǎo)致其中的Calcein的綠色熒光部分甚至全部淬滅,最終導(dǎo)致線粒體中Calcein綠色熒光減弱或消失。這樣根據(jù)線粒體中Calcein綠色熒光的強弱來判斷線粒體MPTP開放的程度,綠色熒光越強,開放程度越低,綠色熒光越弱,開放程度越高。

如果用于流式細胞儀,每個樣品的檢測體系體積為1ml時,可以進行100次檢測;96孔板每孔檢測體系的體積為100μl時可以檢測1000次。

 

產(chǎn)品組份:

編號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

BL928A-1

檢測緩沖液

200mL

BL928A-2

Calcein AM (1000X)

110uL

BL928A-3

CoCl2 (100X)

1mL

BL928A-4

Ionomycin (200X)

600uL

BL928A-5

促溶劑100X

1.2mL

 

使用方法僅供參考詳細見說明書

 

注意事項

1.熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

2.Calcein AM (1000X)須盡量避免反復(fù)凍融。如果多次使用,請注意適當(dāng)分裝。

3.CoCl2有腐蝕性,對人體有害或有刺激性,對人體有呼吸道、生殖等特定器官毒性,或致畸致癌毒性,操作時請小心,并確保有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),并須注意避免腐蝕其它物品。

4.CoCl2對水生生物有毒或有害,禁止直接排入環(huán)境。

5.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

6.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 

保存條件:

-20oC保存,一年有效。Calcein AM (1000X)Ionomycin (200X)需要避光保存。



暫無內(nèi)容...