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產(chǎn)品目錄

TaKaRa 感受態(tài)細胞 E.coli HST04 dam-/dcm-

品名: TaKaRa 感受態(tài)細胞 E.coli HST04 dam-/dcm-
品牌: TaKaRa
型號: 9129
  • 產(chǎn)品詳情
  • 規(guī)格參數(shù)
■ 制品內(nèi)容E.coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells100 μl × 10pUC19 plasmid (0.1 ng/μl)10 μlSOC Medium*1 ml × 10
*SOC Medium:      2% Ttryptone 0.5% Yeast extract 10 mM NaCl 2.5 mM KCl  10 mM MgSO410 mM MgCl2 20 mM Glucose

■ 制品說明
Takara公司在Hanahan's method基礎上進行了改良,制備出E. coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells,當用1 ng pUC19轉(zhuǎn)化100 μl細胞時,轉(zhuǎn)化效率>1×106 cfu/μg。
E.coli HST04 dam-/dcm-是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株,使DNA不被甲基化。使用本菌株轉(zhuǎn)化所得到的質(zhì)粒,可以被對dam、dcm甲基化敏感的限制酶切割。
另外,dam、recA雙重突變的菌株是致死的,本菌株為recA+菌株。因此,易與帶有同源序列的外源DNA發(fā)生重組。本制品只適用于轉(zhuǎn)化已經(jīng)構(gòu)筑好的質(zhì)粒, 而不適用于常規(guī)的克隆轉(zhuǎn)化。

■ 細胞濃度
1-2×109 bacteria/ml

■ Genotype
E. coli HST04 dam-/dcm-: F-ara, △(lac-proAB) [Φ80dlacZ△M15], rpsLstr), thi, △(mrr-hsdRMS-mcrBC), △mcrAdamdcm

■ 保存
-80℃。
注意: 如果不在-80℃下保存,轉(zhuǎn)化效率將會降低。此時,在使用前,請使用附帶的pUC19 對照質(zhì)粒來確認細胞的轉(zhuǎn)化效率。不能液氮保存。

■ 質(zhì)量標準
轉(zhuǎn)入1 ng 的pUC19 plasmid,涂于含有ampicillin的L-plate進行篩選。
轉(zhuǎn)化效率 : >1 x 106 colonies/μg pUC19 plasmid

■ 注意事項
1. 將感受態(tài)細胞從-80℃冷凍取出后請立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。
2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圓底 tubes (CORNING Code No. 352059 或 352057,等),但效率可能會降低。
3. 當使用100 μl感受態(tài)細胞時,加入的高純度質(zhì)粒DNA不要超過10 ng。否則轉(zhuǎn)化效率會降低。
4. 當改變感受態(tài)細胞使用體積或tube類型時,適當調(diào)整反應條件。例如,當使用1.5 ml microcentrifuge tubes時,42℃放置60秒而不是45秒。
5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)化效率可能會降低。
  ·L-broth:10 g Tryptone, 5 g Yeast extract, 5 g NaCl,用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5,使體系終體積為1 L,高壓滅菌。
  ·φ b-broth:5 g Yeast extract, 20 g Tryptone, 5 g MaSO4·7H2O,用1 N KOH調(diào)整pH到7.5,使體系終體積為1 L,高壓滅菌。
  ·L-plates: 10 g Tryptone,5 g Yeast extract,5 g NaCl/1 L water, 使用1 N NaOH調(diào)整pH到7.5,添加agar到1.5%,使體系終體積為1 L,高壓滅菌。
6. 不建議將解凍的感受態(tài)細胞再次冷凍保存。但是,如果再次凍結(jié)不可避免,將細胞置于干冰/乙醇中迅速冷凍,置于-80℃保存。但是,轉(zhuǎn)化效率可能會降低至少一個數(shù)量級。


E.coliHST04dam-/dcm-CompetentCells
品牌CodeNo.產(chǎn)品名稱包裝量
Takara9129E.coliHST04dam-/dcm-CompetentCells1Set(100μl×10支)


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