- 品名: TaKaRa 高保真性的RT-PCR合成cDNA試劑盒(長鏈RNA及富含GC序列的RNA)
- 品牌: TaKaRa
- 型號: R023A
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱:PrimeScript II High Fidelity RT-PCR Kit
商品編號:SPU2021050494
上架時間:2022-01-06
■ 制品內(nèi)容 (50 次量*1) |
PrimeScript II RT Enzyme Mix50 μl5×PrimeScript II Buffer200 μldNTP Mixture (10 mM each)100 μlOligo dT Primer (50 μM)50 μlRandom 6 mers (20 μM)50 μlPrimeSTAR GXL for RT-PCR100 μl5×PrimeSTAR GXL Buffer500 μlControl F-1 Primer*2 (20 μM)10 μlControl R-1 Primer*3 (20 μM)10 μlPositive Control RNA (2×105 copies/μl)20 μlRNase Free dH2O1ml *1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)20 μl、PCR反應(yīng)50 μl,2 Step RT-PCR時可使用50次。*2 Positive Control RNA用上游引物。*3 Positive Control RNA用下游引物。 |
■ 制品說明 |
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶鏈式反應(yīng)) 是一種使用兩種引物擴增目的DNA的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA,RNA不能直接被擴增,但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后擴增 (RT-PCR),PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前,此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領(lǐng)域。PrimeScript II High Fidelity RT-PCR Kit是一種對長鏈RNA及富含GC序列的RNA合成cDNA時具有高保真性的RT-PCR用試劑盒。本試劑盒中使用的PrimeScript II反轉(zhuǎn)錄酶是改良型的PrimeScript RTase,可在合成長鏈cDNA時發(fā)揮效力,同時PCR時使用了對長鏈及富含GC序列的cDNA擴增時具有高保真性的DNA聚合酶PrimeSTAR GXL DNA Polymerase。因PrimeScript II RTase可很好地抑制由于引物錯配引起的非特異性擴增,即使使用高濃度的Oligo dT Primer進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)也不會導致cDNA合成時的阻害作用,因此使用高濃度的RNA作為模板也可進行良好的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本試劑盒中使用PrimeScript II RTase與RNase Inhibitor的混合型PrimeScript II RT Enzyme Mix。另外,PrimeSTAR GXL DNA Polymerase克服了以往的高保真酶由于核酸濃度過高而存在的反應(yīng)阻害性,在高濃度核酸存在條件下也能發(fā)揮其效力,可以在更寬廣的RNA模板范圍內(nèi)獲得cDNA擴增產(chǎn)物。 本試劑盒具有以下優(yōu)點:1. 能夠從長鏈RNA及富含GC序列的RNA中獲得錯配率很低的cDNA擴增產(chǎn)物。2. 在42℃條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)也可以使具有復雜結(jié)構(gòu)的RNA進行良好的延伸。3. 反應(yīng)體系中Total RNA的使用范圍非常寬廣,便于使用。本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及PCR擴增反應(yīng)所需要的全部試劑。并且,也可以進行1 Step RT-PCR反應(yīng)。 |
■ 各種引物的序列 |
引物名稱各引物序列Random 6 mersPd (N)6Oligo dT PrimerTakara獨自開發(fā)的dT區(qū)域的序列Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ |
■ Positive Control RNA |
本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段,DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。 |
圖1. Control RNA:使用Control Primer時所能擴增的DNA片段 |
■ 保存 |
-20℃。 |
■ 使用注意 |
1. 當同時需要進行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時,應(yīng)先配制各種試劑的混合液 (Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture等),然后再分裝到每個反應(yīng)管中。這樣,可使所取的試劑體積更準確,減少試劑損失,避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒炛g產(chǎn)生的誤差。 2. 使用PrimeScript II RT Enzyme Mix、PrimeSTAR GXL for RT-PCR等酶類產(chǎn)品時,應(yīng)輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應(yīng)慢慢吸取。 3. 酶制品應(yīng)在實驗前才從-20℃中取出,使用后也應(yīng)立即放入-20℃保存。 4. 為了防止Positive Control RNA分解,應(yīng)盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃~-80℃。 5. 分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭 (Tip),以防止樣品間污染。 |
PrimeScript?IIHighFidelityRT-PCRKit | |||
品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
Takara | R023A | PrimeScript?IIHighFidelityRT-PCRKit | 50次 |
Takara | R023B(A×4) | PrimeScript?IIHighFidelityRT-PCRKit | 200次 |
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