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產(chǎn)品目錄

TaKaRa 2步法反轉(zhuǎn)錄PCR擴增試劑盒

品名: TaKaRa 2步法反轉(zhuǎn)錄PCR擴增試劑盒
品牌: TaKaRa
型號: RR014A
  • 產(chǎn)品詳情
  • 規(guī)格參數(shù)
  • 商品名稱:PrimeScript RT-PCR Kit

  • 商品編號:SPU2021050491

  • 上架時間:2022-01-06






■ 制品內(nèi)容 (Code No. RR014A ; 50 次量*1)
PrimeScript RTase (for 2 Step)25 μl5 × PrimeScript Buffer200 μlRNase Inhibitor (40 U/μl)25 μldNTP Mixture (10 mM each)150 μlOligo dT Primer (2.5 μM)50 μlRandom 6 mers (20 μM)50 μlTaKaRa Ex Taq HS (5 U/μl)25 μl10 × PCR BufferⅡ250 μlControl F-1 Primer*2 (20 μM)10 μlControl R-1 Primer*3 (20 μM)10 μlPositive Control RNA (2 × 105 copies/μl)20 μlRNase Free dH2O1 ml *1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)20 μl 、PCR反應(yīng)50 μl體系時可使用50次。*2 Positive Control RNA用上游引物。*3 Positive Control RNA用下游引物。 

■ 制品說明
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶鏈式反應(yīng)) 是一種使用兩條引物在目的DNA序列兩側(cè)擴增特異性DNA片段的過程。它是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法,但RNA不能直接被擴增。經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后,PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前,此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領(lǐng)域。PrimeScript RT-PCR Kit是具有良好的延伸性能與高擴增效率的2 Step RT-PCR試劑盒。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)使用了Takara Bio Inc.特別開發(fā)的M-MLV由來的新型反轉(zhuǎn)錄酶PrimeScript RTase;PCR反應(yīng)使用了擴增性能良好的Hot Start 型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS。本試劑盒具有以下優(yōu)點:1. 進行高效的RT-PCR擴增。2. 在標準的RNA反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度 (42℃) 下,便可使具有復雜結(jié)構(gòu)的RNA進行良好的延伸,可以避免RNA在高溫條件下的降解。3. 能有效抑制非特異性的PCR擴增。本試劑盒含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及PCR擴增反應(yīng)所需的全部試劑。 
■ 各種引物的序列
引物名稱各引物序列Random 6 mers       pd (N)6Oligo dT Primer       Takara Bio特別設(shè)計的dT區(qū)域*Control F-1 Primer       5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer       5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′
* 該序列和TaKaRa RNA PCR Kit (AMV) Ver. 3.0 (Code No. : RR019A/B) 的Oligo dT Adaptor Primer不同,不含有與M13 Primer M4匹配的序列。

■ Positive Control RNA
本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。

圖1. Positive Control RNA:使用Control Primer可以擴增462 bp的DNA片段

■ 保存
-20℃。

■ RNA PCR 的原理
PrimeScript RT-PCR Kit首先用PrimeScript RTase將RNA合成cDNA,再取一部分1st strand cDNA作為模板,由TaKaRa Ex Taq HS進行PCR擴增。將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA的引物可以使用Random 6 mers、Oligo dT Primer或特異性下游引物。

圖2. PrimeScript RT-PCR Kit原理圖



圖3. PrimeScript RT-PCR Kit 的操作流程

■ 特點
RNA模板      適用于所有RNA擴增片段大小      ~12 kb反轉(zhuǎn)錄酶      PrimeScript RTase (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)最適溫度42℃)DNA Polymerase      TaKaRa Ex Taq HSRNase Inhibitor      Kit中含有合成第一條cDNA鏈的引物      Random 6 mers、Oligo dT Primer和特異性下游引物

■ 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時Primer的選擇
反轉(zhuǎn)錄引物的選擇,應(yīng)結(jié)合實驗的具體情況,選擇以下三種引物,即:Random 6 mers、Oligo dT Primer或特異性下游引物。對沒有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的短鏈mRNA,上述三種引物都可以使用;一般情況下的反轉(zhuǎn)錄引物的選擇請參照以下說明。
Random 6 mers  適用于長的或具有Hairpin構(gòu)造的RNA。包括rRNA、mRNA、tRNA等在內(nèi)的所有RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)都可使用本引物。Oligo dT Primer  適用于具有PolyA Tail的RNA。(注意:原核生物的RNA、真核生物的rRNA、tRNA以及某些種類的真核生物的mRNA等不具有PolyA Tail)。特異性下游引物(PCR時的下游引物)  必須與模板序列互補,需了解Target序列。

■ 使用注意
1. 當同時需要進行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時,應(yīng)先配制各種試劑的混合液,然后再分裝到每個反應(yīng)管中。這樣,可使所取的試劑體積更準確,減少試劑損失,避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或?qū)嶒炛g產(chǎn)生的誤差。
2. 用PrimeScript RTase、RNase Inhibitor、TaKaRa Ex Taq HS等酶類時,應(yīng)輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應(yīng)慢慢吸取。
3. 酶制品應(yīng)在實驗前才從-20℃中取出,使用后也應(yīng)立即放入-20℃保存。
4. 為了防止Positive Control RNA分解,應(yīng)盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃~-80℃。
5. 分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭,以防止樣品間污染。


PrimeScript?RT-PCRKit
品牌CodeNo.產(chǎn)品名稱包裝量
TakaraRR014APrimeScript?RT-PCRKit50次
TakaraRR014B(A×4)PrimeScript?RT-PCRKit200次


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