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產(chǎn)品目錄

TaKaRa 一步法RNA反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增試劑盒(AMV)

品名: TaKaRa 一步法RNA反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增試劑盒(AMV)
品牌: TaKaRa
型號: RR024A
  • 產(chǎn)品詳情
  • 規(guī)格參數(shù)
  • 商品名稱:TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)

  • 商品編號:SPU2021050499

  • 上架時間:2022-01-06






■ 制品內(nèi)容 (Code No.: RR024A : 50 次量)
AMV Reverse Transcriptase XL*1 (5 U/μl)50 μlRNase Free dH2O1 ml × 2 支RNase Inhibitor (40 U/μl)50 μlAMV-Optimized Taq (5 U/μl)50 μl10X One Step RNA PCR Buffer250 μldNTP Mixture (各10 mM)250 μlMgCl2 (25 mM)500 μlControl F-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用上游引物)25 μlControl R-1 Primer (20 μM)*1(Positive Control RNA用下游引物)25 μlPositive Control RNA*3 (2×105 copies/μl)(poly A+ RNA transcribed from pSPTet3 plasmid)25 μl  *1:各種引物序列
引物名稱各引物序列Control F-1 Primer5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′Control R-1 Primer5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

*2:本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質(zhì)粒 (質(zhì)粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄而得到的。

圖1. Positive Control RNA:進(jìn)行Control實(shí)驗(yàn)時所能擴(kuò)增的DNA片段


■ 制品說明
PCR (Polymerase Chain Reaction;聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)) 是一種體外擴(kuò)增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴(kuò)增DNA,RNA不能直接被擴(kuò)增,但是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄酶的作用把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA后,PCR法便可應(yīng)用于RNA的解析了。目前,此方法已廣泛應(yīng)用于RNA的構(gòu)造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達(dá)解析等多種領(lǐng)域。本試劑盒采用了一步反應(yīng)法 (One Step法) 完成RT-PCR反應(yīng)。RNA→cDNA→PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行,反應(yīng)中途不需添加任何試劑,就可以完成由AMV (Avian Myeloblastosis Virus) 由來的反轉(zhuǎn)錄酶從RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,再由AMV-Optimized Taq (根據(jù)LA PCR技術(shù)研制) 擴(kuò)增cDNA的全部反應(yīng)。常規(guī)RT-PCR試劑盒采用2 step PCR進(jìn)行連續(xù)反應(yīng),并分別配制反應(yīng)液,這些操作增加了污染的可能性,而本試劑盒可降低污染,并且提供的AMV-Optimized Taq可用于LA PCR。本試劑盒中含有進(jìn)行One Step法RT-PCR反應(yīng)用的全部試劑,可以簡便而有效地對RNA進(jìn)行擴(kuò)增分析。 
■ 保存
-20℃。

■ One Step RT- PCR的原理
TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV) 可在同一反應(yīng)管中完成由AMV 反轉(zhuǎn)錄酶從RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,再使用AMV-Optimized Taq擴(kuò)增此cDNA的RT-PCR反應(yīng)。
圖2. One Step RT-PCR原理圖

■ 特點(diǎn)
      RNA模板     適用于所有RNA      擴(kuò)增片段大小     ~5.6 kb      反轉(zhuǎn)錄酶    AMV Reverse Transcriptase XL (反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度在42℃~60℃)      反轉(zhuǎn)錄引物     特異性下游引物(PCR擴(kuò)增反應(yīng)用反義鏈引物)(不可以使用 Oligo dT primer和 Random primer)      DNA Polymerase     AMV-Optimized Taq      RNase Inhibitor     Kit中含有      操作     在同一反應(yīng)管中連續(xù)進(jìn)行 (PCR反應(yīng)前加熱使RTase失活)

■ 注意事項(xiàng)
1. 當(dāng)同時需要進(jìn)行數(shù)次RT-PCR反應(yīng)時,應(yīng)先配制各種試劑的混合液(Master Mix;其中包括RNase Free dH2O、Buffer、dNTP Mixture、MgCl2 等),然后再分裝到每個反應(yīng)管中。這樣,可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確,減少試劑損失,避免重復(fù)分取同一試劑。同時也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用RTase、RNase Inhibitor、AMV-Optimized Taq酶等酶類時,應(yīng)輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應(yīng)管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應(yīng)慢慢吸取。
3. 酶制品應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前才從-20℃中取出,使用后也應(yīng)立即放回-20℃中保存。
4. 為了防止Positive Control RNA分解,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。有條件的實(shí)驗(yàn)室最好保存于-70℃~-80℃。
5. 分裝試劑時務(wù)必使用新的槍頭 (Tip),以防止樣品間污染。
6. 使用本試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時必須使用特異性的反轉(zhuǎn)錄引物,Random 9 mers、Oligo dT Primer不能使用。


TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV)
品牌CodeNo.產(chǎn)品名稱包裝量
TakaraRR024ATaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV)50次
TakaraRR024B(A×2)TaKaRaOneStepRNAPCRKit(AMV)100次


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