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TaKaRa PrimeScript? 一步法RT-PCR定性檢測試劑盒 (Dye Plus)

品名: TaKaRa PrimeScript? 一步法RT-PCR定性檢測試劑盒 (Dye Plus)
品牌: TaKaRa
型號: RR057A
  • 產品詳情
  • 規(guī)格參數
  • 商品名稱:PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus)

  • 商品編號:SPU2021050493

  • 上架時間:2022-01-06






■ 制品內容 (50 次量)
PrimeScript 1 Step Enzyme Mix100 μl2X 1 Step Buffer (Dye Plus)625 μl × 2Control F-1 Primer (20 μM)*120 μlControl R-1 Primer (20 μM)*220 μlPositive Control RNA (2×105 Copies/μl)20 μlRNase Free dH2O625 μl × 2 *1 Positive Control RNA用上游引物。*2 Positive Control RNA用下游引物。 

■ 制品說明
PCR(Polymerase Chain Reaction;聚合酶鏈式反應)是一種體外擴增DNA的簡單而有效的方法。雖然原理上PCR法是擴增DNA,RNA不能直接被擴增,但是經過反轉錄酶的作用把RNA反轉錄成cDNA后,PCR法便可應用于RNA的解析了。目前,RT-PCR方法已廣泛應用于RNA的構造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表達解析等多種領域。本試劑盒采用了一步(One Step)RT-PCR法。RNA→cDNA→PCR反應操作在同一反應體系中連續(xù)進行,反應中途不需添加任何試劑,避免污染危害。同時反應液中已含有電泳時所必需的色素試劑(藍色和黃色色素),反應后可以直接進行電泳。反應液為鮮艷的綠色(Emerald Green),電泳時指示效果明顯,容易觀察樣品的電泳位置。反轉錄反應使用了具有很強延伸能力的反轉錄酶PrimeScript RTase。該反轉錄酶對具有復雜二級結構的RNA模板也具有很強的延伸能力;PCR反應使用了擴增性能優(yōu)越的Hot Start型DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS,大大提高了本試劑盒的擴增性能和反應特異性。反應試劑已優(yōu)化,以實現與不含染料和loading buffer的傳統(tǒng)RT-PCR系統(tǒng)具有相同反應效果。在本試劑盒中,已將PrimeScript RTase、TaKaRa Ex Taq HS、RNase Inhibitor以及One Step RT-PCR用穩(wěn)定劑等配制成了Premix型的PrimeScript 1 Step Enzyme Mix;同時把反應用Buffer、dNTP以及One Step Enhancer Solution配制成了Premix型的2×1 Step Buffer(Dye Plus)的形式,使實驗操作時的反應液配制和電泳檢測更為簡單方便。本試劑盒具有以下特點:1. 進行高效的RT-PCR擴增。2. 反應液制備簡單,可直接進行凝膠電泳。3. 反轉錄溫度可以設定為50℃,能夠有效抑制非特異性擴增。4. 可減少由于錯配和引物二聚體造成的非特異性反應。本試劑盒中含有進行One Step RT-PCR反應用的全部試劑,可以方便有效地對RNA進行擴增分析。 
■ 各種引物的序列
引物名稱各引物序列  Control F-1 Primer       5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′  Control R-1 Primer       5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′

■ Positive Control RNA
本試劑盒中的Control RNA是以pSPTet3質粒 (質粒中的SP6啟動子下游插入長約1.4 kb的pBR322來源的DNA片段,其DNA片段上含有抗四環(huán)素基因) 為模板由SP6 RNA聚合酶經體外轉錄而得到的。

圖1. Positive Control RNA:使用Control Primer可以擴增462 bp的DNA片段

■ 原理
PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2(Dye Plus)可在同一反應管中連續(xù)進行由PrimeScript RTase將RNA反轉錄為cDNA,再由TaKaRa Ex Taq HS擴增此cDNA的RT-PCR反應。

圖2. PrimeScript One Step RT-PCR Kit Ver.2 (Dye Plus) 原理圖

■ 保存
-20℃。

■ 試劑盒特點
       RNA模板  適用于所有RNA       擴增片段大小  ~8 kb  PrimeScript 1 Step Enzyme Mix  PrimeScript RTase  DNA Polymerase (TaKaRa Ex Taq HS)  RNase Inhibitor  2 × 1 Step Buffer (Dye Plus)  含有反應Buffer  dNTP Mixture (終濃度400 μM)  One Step Enhancer Solution  色素、比重劑  1st strand cDNA合成用引物  特異性下游PCR Primer (Oligo-dT Primer和 Random引物不能使用)       操 作  在同一反應管中連續(xù)進行RT-PCR反應

■ 使用注意
1. 當同時需要進行數次RT-PCR反應時,應先配制各種試劑的混合液,然后再分裝到每個反應管中。這樣,可使所取的試劑體積更準確,減少試劑損失,避免重復分取同一試劑。同時也可以減少實驗操作或實驗之間產生的誤差。
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix時,應輕輕混勻,避免起泡;分取之前要小心地離心收集到反應管底部;由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時應慢慢吸取。
3. 2 X 1 Step Buffer (Dye Plus) 使用前用Vortex充分混勻,離心后使用。
4. 酶制品應在實驗前才從-20℃中取出,使用后也應立即放回-20℃中保存。
5. 為了防止Positive Control RNA分解,應盡量避免反復凍融。有條件的實驗室最好保存于-70℃~-80℃。
6. 分裝試劑時務必使用新的槍頭,以防止樣品間污染。
7. 使用本試劑盒進行反轉錄反應時必須使用特異性的反轉錄引物,Random Primer、Oligo dT Primer不能使用。


PrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2(DyePlus)
品牌CodeNo.產品名稱包裝量
TakaraRR057APrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2(DyePlus)50次
TakaraRR057B(A×4)PrimeScript?OneStepRT-PCRKitVer.2(DyePlus)200次


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