- 品名: 上海酶聯(lián) 黃曲霉毒素M1檢測(cè)試劑盒ml036118
- 品牌: 國(guó)產(chǎn)其他
- 型號(hào): ml036118
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
黃曲霉毒素M1檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
(酶聯(lián)免疫法)
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)液態(tài)奶、及奶粉樣品中的黃曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)殘留量,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的黃曲霉毒素M1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗黃曲霉毒素M1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素M1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中黃曲霉毒素M1的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.02ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
液態(tài)奶…………………………………0.04ppb
奶粉……………………………………0.06ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
黃曲霉毒素M1…………………………100%
2.5 樣本回收率:
液態(tài)奶…………………………………85%±15%
奶粉……………………………………80±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.02ppb、0.06ppb、0.18ppb、0.54ppb、1.62ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
2 X濃縮復(fù)溶液(黃蓋)……………40ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說(shuō)明書(shū)………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0μl-200μl,100μl-1000μl、多道300μl
4.3 試劑:乙腈、純化水(去離子水)
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:復(fù)溶液:
將2 X濃縮復(fù)溶液用去離子水按1:1體積比進(jìn)行稀釋(1份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水)
配液2:樣品提取液配制:
84%乙腈-水溶液(84份乙腈+16份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1液態(tài)奶
1)取1ml液態(tài)奶于50ml離心管中,加入4ml乙腈,振蕩5min, 4000r/min,離心10min;
2)取2.5ml清夜,于50℃下氮?dú)獯蹈苫蛩]干。加1ml復(fù)溶,振蕩混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):2 檢測(cè)下限:0.04ppb
5.3.2奶粉
1)稱取5.0g奶粉于50ml離心管中,加入20ml樣品提取液,振搖5min,過(guò)濾或4000r/min,離心10min;
2)取1ml濾液或清夜,于50℃下氮?dú)獯蹈苫蛩]干。加750ul復(fù)溶液,振蕩混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):3 檢測(cè)下限:0.06ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編 號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50μl/孔,再加入50μl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗 滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯 色:每孔加入底物液A 50μl,再加底物液B 50μl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終 止:每孔加入終止液50μl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)= | A | ×100% |
A0 |
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索取)
8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。